[1]郑戎秉,李旦,沈佳怡,等.人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化[J].浙江科技大学学报,2020,(06):516-522.
Optimization of human SPINK6 expression in Escherichia coli[J].,2020,(06):516-522.
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人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化(/HTML)
《浙江科技大学学报》[ISSN:2097-5236/CN:33-1431/Z]
- 卷:
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- 期数:
-
2020年06期
- 页码:
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516-522
- 栏目:
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- 出版日期:
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2021-01-20
文章信息/Info
- Title:
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Optimization of human SPINK6 expression in Escherichia coli
- 文章编号:
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1671-8798(2020)06-0516-07
- 作者:
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郑戎秉; 李旦; 沈佳怡; Ulf Meyer-Hoffert; 吴志宏
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1.浙江科技学院 生物与化学工程学院,杭州 310023;2.德国基尔大学 医学院皮肤学研究所,德国 基尔 24105
- Author(s):
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1.School of Biological and Chemical Engineering, Zhejiang University of Science and Technology, Hangzhou 310023, Zhejiang, China; 2.Department of Dermatology, UniversityHospital SchleswigHolstein, Campus Kiel, 24105 Kiel, Germany
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- 关键词:
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丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6; 激肽释放酶相关肽酶; 重组表达
- 分类号:
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Q812
- 文献标志码:
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A
- 摘要:
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丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化。结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6 061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(Ki=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(Ki=185±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性。采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK6 3.32 mg。研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源。
更新日期/Last Update: