[1]郑戎秉,李旦,沈佳怡,等.人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化[J].浙江科技学院学报,2020,(06):516-522.
 Optimization of human SPINK6 expression in Escherichia coli[J].,2020,(06):516-522.
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人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化()
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《浙江科技学院学报》[ISSN:1001-3733/CN:61-1062/R]

卷:
期数:
2020年06期
页码:
516-522
栏目:
出版日期:
2021-01-20

文章信息/Info

Title:
Optimization of human SPINK6 expression in Escherichia coli
文章编号:
1671-8798(2020)06-0516-07
作者:
郑戎秉李旦沈佳怡Ulf Meyer-Hoffert吴志宏
1.浙江科技学院 生物与化学工程学院,杭州 310023;2.德国基尔大学 医学院皮肤学研究所,德国 基尔 24105
Author(s):
1.School of Biological and Chemical Engineering, Zhejiang University of Science and Technology, Hangzhou 310023, Zhejiang, China; 2.Department of Dermatology, UniversityHospital SchleswigHolstein, Campus Kiel, 24105 Kiel, Germany
关键词:
丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6激肽释放酶相关肽酶重组表达
分类号:
Q812
文献标志码:
A
摘要:
丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化。结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6 061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(Ki=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(Ki=185±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性。采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK6 3.32 mg。研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源。
更新日期/Last Update: