人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化-《浙江科技学院学报》

文章信息/Info

作者:: 郑戎秉; 李旦; 沈佳怡; Ulf Meyer-Hoffert; 吴志宏; 1.浙江科技学院生物与化学工程学院,杭州 310023;2.德国基尔大学医学院皮肤学研究所,德国基尔 24105

Author(s):: 1.School of Biological and Chemical Engineering, Zhejiang University of Science and Technology, Hangzhou 310023, Zhejiang, China; 2.Department of Dermatology, UniversityHospital SchleswigHolstein, Campus Kiel, 24105 Kiel, Germany

摘要:: 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化。结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6 061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(Ki=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(Ki=185±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性。采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK6 3.32 mg。研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源。